將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤(pán)置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿(mǎn)整個(gè)柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵入溶劑，至溶劑流出止。

2.上樣

將冬凌草的乙醇提取物400G用適量丙酮溶解，泵入中壓柱柱頭，然后泵入石油醚1000RID。

3.洗脫

以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液，60ML/MIN的流速進(jìn)行梯度洗脫，柱的使用壓力為2～ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC檢識(shí)展開(kāi)劑丙酮一*仿(2：8)，顯色劑5%香草醛濃硫酸乙醇液

至洗脫*，相同流份合并，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加入適量甲醇熱溶后自然放置，析出結(jié)晶，為冬凌草甲素。

4.層析柱再生、平衡

有效成分經(jīng)TLC檢識(shí)全部流出后，用純丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚(5：95)平衡后，可再次上樣，反復(fù)使用(使用次數(shù)隨原料不同而異，一般可連續(xù)使用2—6個(gè)月以上)。

5.重結(jié)晶

冬凌草甲素結(jié)晶析出*后，減壓過(guò)濾，然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保留，作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置，結(jié)晶再次析出，待結(jié)晶*后，抽濾，用少量乙*洗滌，將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。

6.薄層層析分析

取適量冬凌草甲素對(duì)照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品甲醇溶解后點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以*仿一丙酮(8：2)為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)，5% 香草醛濃硫酸乙醇液顯色，于105。C烘至斑點(diǎn)清晰。表明在該展開(kāi)系統(tǒng)下，冬凌草甲素樣品和對(duì)照品都具有相同的RF值，并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn)，在制備的冬凌草甲素樣品中，沒(méi)有雜質(zhì)斑痕。